Langsung ke konten utama

KLONING GEN

 

KLONING GEN

Istilah kloning berasal dari kata “clone” yang artinya potongan. Kloning gen dapat diartikan sebagai suatu proses yang digunakan untuk memanipulasi DNA dan kemudian dikembalikan pada organisme hidup untuk diekspresikan. Teknologi ini memampukan untuk mengisolasi DNA tertentu dari genom suatu organisme hidup, kemudian mentransformasinya menggunakan vektor pada suatu inang tau dalam pengertian lain kloning gen merupakan proses penggabungan gen target ke dalam  molekul DNA yang dapat bereplikasi sendiri (vector) dan proses amplifikasi menghasilkan DNA rekombinan pada sel inang yang sesuai (Mishra et al. 2014). Prinsip kloning DNA/gen yaitu memasukkan suatu DNA/gen tertentu ke dalam vector yang dapat bereplikasi sendiri di dalam sel inang (bakteri/kapang) sehingga menghasilkan kopi DNA/gen yang identik (Yatera et al. 2021). Kloning gen memiliki keterkaitan dengan DNA rekombinan. Proses DNA rekombinan meliputi isolasi DNA, pemotongan dan penyambungan DNA dan pemasukan DNA ke sel (Pranita et al. 2021). Prosedur kloning terdiri dari isolasi plasmid DNA yang mengandung sekuens yang diinginkan, digesti (cutting) plasmid dengan restriction endonuclease, pemisahan fragmen dengan elektroforesis, pemurnian DNA target, ligasi (penyambungan) DNA ke plasmid baru untuk membentuk rekombinan baru, transfer plasmid yang berhasil disambung ke sel (Transformasi), seleksi bakteri yang berhasil menerima plasmid (Transforman) serta analisis plasmid rekombinan (Langden et al. 2017).

DNA atau gen yang akan dimasukkan ke dalam sel inang memerlukan suatu kendaraan yang disebut dengan vektor. Vektor dapat diartikan sebagai molekul DNA yang dapat ditempatkan dalam suatu sel dan digunakan sebagai pembawa (carrier) DNA asing pada sel tersebut. Vektor harus memiliki kemampuan untuk bereplikasi secara mandiri dalam sel bakteri sehingga tidak perlu diinsersi pada genom bakteri. Vektor memiliki setidaknya satu selectable marker agar kita dapat mengidentifikasi keberadaan vektor tersebut dalam sel bakteri.  Marka atau penanda selektif (selectable marker) berfungsi mengidentifikasi sel bakteri yang mengandung plasmid serta membedakan plasmid yangmengandung hasil kloning suatu DNA asing. Beberapa tipe vektor yang dapat digunakan yaitu plasmid, lambda phage, cosmid, bacterial artificial chromosome dan yeast artificial chromosome. Vektor yang paling banyak digunakan dalam penelitian yaitu dalam bentuk plasmid. Plasmid dapat diartikan sebagai molekul DNA double-stranded berbentuk sirkuler atau linear yang dapat bereplikasi secara independent yang ditemukan pada sel prokariot (Mujayana et al. 2019). Plasmid  mempunyai  3  komponen penting  yaitu Origin  of  replication(ORI), sehingga  plasmid  dapat  bereplikasisecara mandiri, mempunyai  daerah  unik  sebagai situs    pemotongan    enzim    endonuclease, yang   biasa   disebut multiple   cloning   site (MCS),   dan  membawa    penanda    seleksi (biasanya   resistensi   terhadap   antibiotika) untuk  membedakan  antara  sel  inang  yang mengandung plasmid atau tidak (Hardianto et al. 2015).  

DNA tertentu yang akan dimasukkan ke dalam plasmid harus memiliki situs enzim restriksi yang sama. Enzim restriksi dapat diartikan sebagai enzim yang memotong situs DNA pada bagian tertentu pada sekuen DNA. DNA dan plasmid yang telah dipotong pada situs yang sama akan disambungkan menggunakan enzim ligasi dan ditransformasikan ke dalam bakteri lalu direplikasi dalam media tumbuh (Purwaningrum  et al. 2018). Penelitian yang dilakukan Novita et al. (2016), gen putative cleavage protein 1 (PCP-1) dari udang vaname yang terserang Infectious Myonecrosis Virus berhasil dikloning, berdasarkan hasil isolasi plasmid cDNA PCP-1 yang menunjukkan semua koloni bakteri terseleksi membawa plasmid hasil insersi DNA gen PCP–1. Analisis kesejajaran urutan nukleotida menunjukkan bahwa cDNA dari gen PCP-1 nilai homologinya mencapai 100% dan 99% dengan sekuen di Genebank yaitu identik dengan sekuen dari Brazil dan Indonesia.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

DAFTAR PUSTAKA

Hardianto D, Indarto A, Sasongko ND. 2015. Optimasi metode lisis alkali untuk meningkatkan     konsentrasi plasmid. Jurnal Bioteknologi dan Biosains Indonesia 2(2): 60-64.

Langden SSS, Budiharjo A, Wijanarka, Kusharyoto W. 2017. Transformasi dan kloning plasmid     PJ804:77539 pada E. coli top’10. Jurnal Biologi. 6(1): 65-70.

Mishra N, Khan RH, Dwivedi B, Mishra SK. 2014. Cloning of gene coding glyceraldehyde 3-       phospate dehydrogenase. Asian Journal of Pharmacy and Technology. 4(4): 184-188.

Mujayana, Nurjanna, Syakariah M. 2019. Teknik penyiapan vaksin double stranded RNA (dsRNA) VP 15 dengan metode pemanasan bakteri. Buletin Teknik Litkayasa Akuakultur.           17(2): 137-141.

Novita H, Sunarto A, Andriyanto S. 2015. Kloning gen putative cleavage protein 1 (PCP-1) pada        udang (Litopenaeus vannamei) yang terserang infectious myonecrosis virus. Media Akuakultur. 11(1): 27-33.

Pranita NP, Novtarina R, Nugroho RC, Himayani R, Ismunandar H. 2021. Penerapan         Bioteknologi DNA Rekombinan: Pengembangan Vaksinasi COVID-19. Medical         Profession Journal of Lampung. 11(3): 300-305.

Purwaningrum M, Verawati V, Haryanto A. 2018. Deteksi molekuler gen fusion (F) dan analisis      perbandingan beberapa enzim restriksi sebagai penentu patotipe virus newcastle       disease. Jurnal Nasional Teknologi Terapan. 2(3): 309-320.

Yatera K, Noguchi S, Mukae H. 2021. Perspective on the clone library method for infectious diseases. Respiratory Investigation. 59(6): 741-747.

 

Komentar

Posting Komentar

Postingan populer dari blog ini

Manfaat dan bahaya sayur bayam

        Sayur adalah pangan yang kaya akan zat gizi seperti vitamin,mineral,serat,dan antioksidan. Karena kandungan gizinya yang tinggi, para dokter dan ahli gizi di seluruh dunia menganjurkan masyarakat untuk mengkonsumsi sayuran secara rutin. Selain itu banyak penelitian yang membuktian bahwa mengkonsumsi sayur secara rutin memiliki banyak manfaat bagi kesehatan.    Namun, perlu diketahui bahwa ternyata sayur bayam juga memiliki bahaya bagi kesehatan tubuh lho! 1. SEJARAH SAYUR BAYAM      Sayuran yang memiliki nama ilmiah Amaranthus sp . ini dianggap sebagai raja sayuran karena kandungan gizinya yang tinggi. Bayam berasal dari Amerika Selatan dan Tengah. Bermula dari suku asli meksiko,Aztec,yang telah membudidayakan bayam berjuta tahun lalu. Dikalangan suku tersebut Bayam merupakan tanaman yang penting dari bagian kebudayaan mereka. Bahkan, mereka membuat patung-patung dewa dari adonan bayam,yang akhirnya akan dimakan. Bukan hanya i...
Posting Komentar
Baca selengkapnya

CARA MENDAPATKAN SERTIFIKAT GRATIS DI MASA PANDEMI

 Hai teman-teman,      Pandemi Covid-19 yang belum kunjung mereda membuat banyak masyarakat jenuh. Keterbatasan untuk mengakses hal-hal baru juga hanya bisa dilakukan dirumah melalui online. Keinginan untuk meningkatkan prestasi juga sulit dilakukan diluar rumah.     Terkadang kita sering merasa down  karena melihat prestasi teman-teman kita yang terus berkembang meskipun di masa pandemi. Tidak sedikit mereka mendapatkan E-Certificate . Daripada menghabiskan waktu untuk hal-hal yang tidak berguna, lebih baik kita meningkatkan kemampuan diri kita di masa pandemi. "Hmmm, pasti bayar nih!"     NO!  Sertifikat ini bisa kalian dapatkan dengan gratis lho! Berikut daftar website untuk mengasah kemampuan teman-teman dan mendapatkan sertifikat gratis! 1) Microsoft 365  Teman-teman bisa kunjungi  link berikut untuk mendapatkan sertifikat gratisnya:  Caranya mudah banget, teman-teman cukup mendaftar menggunakan email teman-teman. Se...
1 komentar
Baca selengkapnya

GAYA REMAJA MASA KINI

PENGERTIAN Gaya hidup merupakan gambaran bagi setiap orang yang menggambarkan seberapa besar nilai moralorang tersebut dalam masyarakat di sekitarnya dan bagaimana cara orang tersebut hidup. Sebagian besar remaja zaman sekarang itu menyalahgunakan gaya hidupnya, apalagi remaja-remaja yang hidup di kota metropolitan. Dan bukan hanya orang-orang di kota metropolitan saja yang mengikuti trend mode di zaman sekarang dahkan di perkampungan dan pedesaan pun banyak yang mengikutinya selagi mereka menanggapi hal itu dengan negatif. Remaja zaman kini itu selalu dikaitkan dengan teknologi. Banyak di sekitar kita wanita yang memakai celana pendek di depan umum yang di ajarkan dalam ajaran islam yaitu harus menutup aurat kecuali telapak tangan dan muka bagi seorang wanita yang beragama islam. Sebagian besar mereka lebih mengikuti trendmode di masa kini, seperti contohnya berpakain seperti orang luar negeri dan bergaya kebarat-baratan. Yang kita tahu bahwa trend mode yang ada di luar negeri itu ...
1 komentar
Baca selengkapnya